免疫组织化学法—周全剖析（Microimage译）

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原文：免疫组织化学法

Caitlin Smith

免疫组织化学法焦点技巧是可以看到我们肉眼看不到的物体，还可以更准确的定位。固然听起来这种技巧的功效很壮大，然则IHC技巧在成长中危机并存。

“IHC中每一步都可能影响到最终的成果，”Thermo Fisher的卵白研讨产物部分技巧司理Priya Rangaraj说。IHC全部庞杂的进程中任何一步都弗成以疏忽，因为这些对最终成果都有很主要的影响。要胜利完成IHC，必需要斟酌到许多尺度，包含样品的预备，试剂如抗体和关闭洗涤的缓冲液，更优化的操作步调，用更好的办法去显示最终的成果等等。IHC是一门异常主要的基本技巧，分歧学科的科研人员经由过程IHC技巧互相交叉。IHC是分歧学科衔接的桥梁，好比外科病理学和分子病理学，基本科学和临床医学，外科和放射学等等。下面简略介绍今朝这一技巧成长的主要事宜.

抗体

用于IHC中的新目的抗体正在逐渐的被发明。据Rangaraj说，Thermo Fisher公司新的Thermo Scientific Fluorescent DyLight 594-, 693-, and 488-联合链霉亲和素，羊抗鼠IgG，羊抗兔IgG联合物等比在IHC和其他研讨中运用的Alexa, CyDyes和LI-COR染料具有更强的荧光强度和光稳固性；是以它们加倍合适须要高光稳固性的研讨中，好比共聚焦扫描。假如须要更高的敏感性，Thermo Fisher公司的辣根过氧化物酶联合物——高敏感性链霉亲和素-HRP，稳固化羊抗鼠IgG Whole Molecule (GAM)，和羊抗兔IgG Whole Molecule (GAR)。Rangaraj强调说，高敏感性链霉亲和素-HRP，稳固化的GAM和GAR没有非联合卵白的存在，确保稳固性亲睦的信噪比，这两个特征在IHC中都是挑衅。DyLight Dye-联合链霉亲和素和NeutrAvidin-Biotin联合卵白在同biotinylated抗体一路应用时可以进步旌旗灯号强度。

很多抗体供给商都在强调他们供给的抗体是经由验证的。平日是经由过程一个自力的技巧如Western blotting验证。Bethyl试验室用经由系列验证的IHC抗体用于福尔马林处置，白腊包埋的组织。“最 的挑衅就是IHC测试诊断和预后指标的接收水平，和将分子测试跟IHC联合到一路，” Bethyl的履行副总裁Debbie Garrett说，“将来我们将看到更多验证的IHC抗体用于诊断和预后测试，比分子诊断更有优势。”

Cell Signaling Technology（CST）公司供给的抗体可以用在全卵白和激活状况的卵白中（好比磷酸化的卵白）。CST公司已经将这些抗体在病人样本和鼠癌模子中验证过。CST的研讨人员用了一系列办法验证激活状况抗体的特异性，用途理和未处置过的白腊包埋细胞，磷酸酶处置，关闭肽，组织芯片和xenografts等。今朝最 的挑衅是对激活状况的抗体（磷酸特异性）和验证技巧的契合。另一个重要的挑衅是IHC技巧中激活状况抗体的全体运用。

Sigma-Aldrich和Atlas Antibodies结合推出Prestige Antibodies™，由Human Protein Atlas的人类卵白组资本部分开辟一个有4000个抗体的抗体库，“目的是以每年几千个的速度增加，最终在2015年到达一个抗体可以与22000非冗余人体卵白。”Sigma-Aldrich抗体产物部司理Jeff Xue说。他还强调Prestige Antibodies是商用抗体中验证最靠得住的抗体。“在Human Protein Atlas，每一个抗体都有跨越500张免疫组织化学图片颁布，Prestige Antibodies在单一试验计划中进行优化及为高通量试验专用，为科研人员节俭了时光和金钱。”Xue指出，IHC技巧成长的瓶颈是缺少人体多半卵白的验证抗体，然则愿望Sigma和Human Proteome Resource部分的合作会战胜这一瓶颈。

IHC与癌症

Xue以为IHC中最令人高兴的成长就是在以组织基本的癌症诊断，即在组织样品中抗体与要诊断的转移肿瘤感化。免疫组织化学法已经用于区分白血病、淋巴瘤，肯定细胞表皮发展因子受体，乳腺癌病人的活检标本中HER-2表达剖析。组织芯片（将多个组织样品置于单一载片上）的成长，使组织样品在筛选进程中避免了逐批处置的差别，因为抗原修复，所用试剂、温浴时光和温度都是一致的。Scharf也对IHC用于癌症研讨中充斥了信念。他说，“在我看来，最令人高兴的成长就是在IHC顶用这些抗体肯定癌症病人亚群的通路活化。病人的分层以通路活化为基本，如许可以针对病人提出靶向治疗而不是传统的体系化疗。”

Teruya-Feldstein和她的研讨组用IHC办法研讨癌症的分歧方面及其治疗办法。他们研讨新抗体的目标是愿望可以有助于更的诊断肿瘤的类型，或者是找到可能的治疗靶点。他们同时还研讨可以在临床病例的活组织样本中作为预后生物标志物的候选抗体。接下来的研讨，是赞助他们找到是否有特异的标志物可以猜测对特别治疗办法的效应。他们还用IHC研讨组织芯片中已获取的人体组织样本的病理学研讨，试图将临床病理特点和临床存活病例接洽起来。最后，他们用IHC肯定从卵白和基因表达中模拟研讨的成果，还可以肯定那种细胞类型和亚定位在感兴致基因的表达中是相干的。Teruya-Feldstein以为，新的成长包含同时检测的发色团的开辟，在卵白表达相干基因中探测基因表达程度的发色团探针等。Teruya-Feldstein以为IHC成长仍然要面临一些局限，好比质量掌握和数据读取和其他试验计划切实其实认，这些在试验室内部和试验室之间都是存在的。

IHC与干细胞

干细胞研讨中也应用了IHC技巧的筛选的功效将祖细胞分组。Millipore推出一系列对人类胚胎干细胞（HES）特异性的验证抗体。据Millipore产物部司理Rebecca Dominici讲，传统的干细胞标志物不克不及对所有的人类胚胎干细胞特异标志；相反，新的Millipore的IHC验证抗体可以对如人类胚胎干细胞抗原1和2（HESCA-1/2）特异标志，并不会染上正在分化的和豢养细胞。Millipore还推出一种新的GCTM-5的验证抗体，一个标志肝脏和胰脏前体细胞亚群的早期细胞外面标志物。Millipore性命科学部产物司理Gabriella Armin说，“干细胞的感化仅仅在干细胞微情况层面进行研讨。应用Millipore的干细胞IHC抗体可以研讨他们内部之间的关系。”

中国显微图像网推举原文出处：

http://www.biocompare.com/Articles/TechnologySpotlight/963/Immunohistochemistry-Looking-With-Molecules.html

Immunohistochemistry: Looking With Molecules

Technology Spotlight

Monday August 25, 2008 by Caitlin Smith

At the heart of immunohistochemistry (IHC) lies the ability to see things that we couldn’t see with just our eyes, and the ability to detect the locations of these things with some degree of precision. Though it sounds straightforward on its surface, IHC is a technique fraught with opportunities to falter.