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细菌生长观察用倒置显微镜—菌落观察与计算法
I.系列稀释
1. 将试管标上欲稀释倍数，如 10
-1、10-2、10-3；并于每管加入900 μl 蒸馏水。
2. 取100 μl 原菌液加入支稀释管中混匀，再由此管吸出100 μl 加至下
一稀释管中混匀，以此类推，进行系列稀释。
II.涂盘
1. 取三个LB plate，在培养皿底部标明组别及日期，并写上稀释倍数。
2. 从不同稀释管中各取出50 μl 样品，加入标明稀释倍数的LB plate。
3. 取出浸于95%酒精溶液的三角玻棒，以燃烧法??将酒精燃尽后，轻触LB
plate 无菌处或藉由空气冷却，待玻棒冷却才能进行涂盘。 【务必注意！
高温或着火的三角玻棒不可插回酒精杯中，以免发生火灾! 玻棒弯曲
部分应朝下，避免酒精沿玻棒烧伤手部】
4. 涂盘时，将玻棒轻放于平板表面，以左手旋转LB plate，右手将玻棒前
后推动，使菌液均匀涂布于平板表面。
5. 将玻棒浸于95%酒精中，取出后再以火焰燃烧玻棒，进行灭菌。
6. 待玻棒冷却再进行第二个培养皿的涂盘。
7. 使用封口蜡膜将培养皿封好并倒置，于37 ℃培养箱中培养过夜，隔日
观察及计算菌数一般以30~300 个菌为主。
观察与计算
1. 观察并计算所有平板上之菌落数，若平板上菌落数超过300 视为过多无
法计算，记录为too numerous to count (TNTC)，若菌落数少于30 视为过
少，记录为too few to count (TFTC)，仅计算30 至300 之间的菌落数，
凡表面或表面下之菌落均需计算在内。
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