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内皮细胞的培养实验操作步骤简介-无菌实验
【实验操作】
取材
(1)取新生1---2d的大鼠1只，采用脱颈椎法将其处死。
(2)用70%的乙醉擦拭大鼠全身3遇。
(3)在无菌条件下，用解剖剪剪开大腿皮肤，剥去皮毛。
(4)用眼科剪取下大腿肌肉，将其置于盛有D-Hanks液的培养皿中。
(5)除去肌肉组织上黏连的脂肪组织，并将肌肉中的骨骼剔除。
(6)将上述肌肉组织用D-Hanks液再反复清洗3遍，然后置于含用培养基的培养皿中。
消化
(1)用眼科剪将肌肉组织剪成大小为1mm3的小块，
放人盛有胶原酶液(2000U/ml)的三角烧瓶中，于37℃消化24h左右。
(2)吸管用力吹打消化后的肌肉组织块，用无菌的沙网将吹打后
残余的组织碎块加以滤过，收集细胞悬液于lOml离心管中。
(3) 800r/min离心5min，弃上清。
(4)加人含10%胎牛血清的培养基，吹打沉淀的细胞，制备细胞悬液。
(5)将细胞接种于覆盖有0.01%明胶的培养皿中，接种量可增大到2X10六次方个细胞/皿。
(6)将培养皿置于37℃培养箱中进行培养，4'--5d后即可得到大量的骨骼肌细胞。
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