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用倒置相差显微镜的用途-计数器放于显微镜载物台上
操作步骤
a.准备计数器。轻轻地湿润中央网格区域的各个边，用两个拇指的压力使盖玻片水平
地从边缘滑动。当在中央标记区临近的任何一边均能肴见牛顿环(彩虹色)时，盖玻片位义
正确(注1:当盖玻片位置正确时，改良的Neubauer计数器的厚度是1mm;依据0.1mm x
lrnmX lmm体积决定细胞数的计算。如果盖玻片位置不正确，细胞数汁算会有错误。
b. 1000r/min离心细胞悬液5min.弃上清。将细胞重悬于已知体积的培养基中。
c.用巴斯德吸管来回吹打细胞悬液几次，混匀.确定细胞均匀分散。
d.用微量加样器吸取2505L混匀的细胞悬液，转人袖珍管。用一个干净的加样器尖吸
取等体积台盼蓝溶液加入细胞悬液中。用拇指和食指快速轻弹袖珍管几次使之混匀。立即用
一个巴斯德吸管尖吸取一滴细胞悬液，轻轻地将其滴在临近计数区的盖玻片边缘上，毛细作
用使细胞悬液移到盖玻片下面。填满中央和边缘沟之间的区域。在盖玻片的另一边重复该操
作(注:如果盖玻片没有正确放咒，计数器和计数器任何一边的小沟里将溢满细胞悬液，无
法获得准确的细胞计数)。
e.将计数器放于显微镜载物台上，移动载物台直到将三条平行线界定的25个小方格的
网格位于中央为止。计25个小方格内的总细胞数(染色和未染色的)(它们每一个又再分为
16个更小的方格便于计数)。为了避免将同一个细胞重复计数.只数三线隔开的压上线、左
手线和中央区的细胞。如果细胞数大可用一个计数器(注1:计数面积取决于细胞密度。如
果中央的方格细胞数达到100.这个对于度而言足够了。如果细胞密度较低，计数四个
角的总细胞数，并取平均值。为了更建议重复细胞计数，并取两次读数平均伉。注2:
如果用倒置相差显微镜，不染色即可区分活细胞和死细胞。活细胞明亮可折射出清楚的轮
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