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荧光彩色成像需考虑滤光片的交叉-生物荧光分析
应用滤光片组进行荧光多色成像需要重点考虑滤光片的交叉干扰(cross talk,通
常也称为crossover或bleed through),滤光片干扰意味着一个FP的荧光信号溢出到另
一个信号通道中。这种干扰既可发生于FP的激发也可发生于发射。两个或更多荧光团
之间的激发干扰作用于光谱的蓝光部分，而发射干扰作用于光谱的红光部分。例如.
GFP通常可以通过红光发射滤光片检侧到，而红色荧光蛋自通常不能通过绿色滤光片
检测到。山于这种原因.多色成像时首先使用不产生短波于扰的激发光对远红外荧光
蛋白进行成像。例如，用共聚焦显微镜多线氢激光对EYFP和EGFP在同一细胞中成
像时.EYFP首先用超过EGFP吸收位的514nm激发，然后用530-550nm波段滤光
片收集发射光。发射滤光片不是很关键，因为在这里只有EYFP被激发。第二次扫描
用于成像EGFP。这里使用458nm或477nm认激光线激发，然后用非常窄的490
500nm发射滤光片成像。这种滤光片可以地排除EYFP荧光而只抓取EGFP的特
定光学信号。茧然488nm复激光接近EGFP的更大激发值，但是它非常接近发射滤光
片通带，因此所收集的影像有激光干扰。
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