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西城实习介绍之DNA制备与纯化-光学显微镜常识

作者: 发布时间:2022-07-02 20:57:25点击:1218

信息摘要:

大家好,这里是老上光显微镜知识课堂,在这里你可以学到所有关于显微镜知识,好的,请看下面文章:注射用DNA制备与纯化材料:

大家好,这里是老上光显微镜知识课堂,在这里你可以学到所有关于显微镜知识,好的,请看下面文章:
注射用DNA制备与纯化
材料:
1.    经超高速离心分层抽取之 DNA
2.    LMP agarose
3.    电泳设备
4.    5 M NaCl
5.    3 M NaOAc,pH 6.0
6.     酒精
7.    TE
8.    phenol,phenol/chloroform(1:1 v/v)等体积混合液
9.    65℃水浴槽
   10.  1 ml 注射针筒及 0.22 mm 孔径过滤膜
 实验步骤:
1.    依据质体构筑时的图谱,选择适当的限制酶将质体的骨架(backbone)切除。
2.    将切割完全之 DNA 以含 EtBr 的 LMP 进行电泳分离 DNA 及骨架。
3.    待分离完成后,在(长波)紫外灯下以刀片切下欲纯化的胶,分装至微量离心管,平均每管约400 ml。
4.    将微量离心管置  65℃ 水浴槽中 约5',观察至胶完全融解。
5.    加入 20 ml 5M NaCl,再放入 65℃ 水浴槽中约1'。
6.    取出微量离心管后,依序以phenol萃取两次、phenol/chloroform萃取一次、chloroform萃取一次。
7.    加入 1/20 体积之3 M NaOAc 及 2.5 倍体积之纯酒精沉淀。
8.    离心14000 rpm,10'后,丢弃酒精。
9.    加入 70% 酒精。接着离心14000 rpm,1' 后去酒精。
   10.   风乾后溶于适量的TE。
   11.   取些许之DNA定量(以胶电泳方式比对 λ/H3 之 DNA 标记)。
   12.   将 DNA 之浓度以 TE 调整至 10-20 ng/ml。
   13.   以 0.22 mm 孔径之过滤膜过滤后,分装小量至微量离心管,并储存于 -80℃,
  尔后每进行一次显微注射即取出一小管,且不再重覆使用。



血管正面的缝合更好紮实,因为背面会比较难缝。



看起来不难

实际应该很难XD



话说那台比人还高的多人解剖体视显微镜 



研究设备及器材
项目 器材名称
数量
项目
器材名称
数量
1
解剖显微镜
一台
6
地毯
一块
2
保丽龙球
数个
7
魔鬼毡
一片
3
蟑螂
数只
8
砝码
数个
4
压克力板
一片
9
木板
一块
5
铁丝
数支
10
饲育箱
四个

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