如何制作动物染色体标本

    细胞处于活跃的增值状态或者通过人工的各种处理后，细胞进入分裂的动物组织科用于染色体的分析。由于在正常的动物骨髓内，细胞是处于不断分裂的，给其注射一定的秋水仙碱可以让许多细胞处于分裂的细胞停在细胞分裂中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。

    实验用品

　　一、 材料

　　小白鼠

　　器材

　　水平离心机、显微镜、刻度离心管（10ml）、注射器（1ml）、载玻片、烧杯（400ml）、量筒（100ml）、试管架、镊子、剪刀、解剖刀、吸管。

　　二、 试剂

　　1. 2%柠檬酸钠溶液：称取2g柠檬酸钠（柠檬酸三钠，Tri-sodium citrate, AR）溶解于100ml蒸馏水中。

　　2. 1%柠檬酸钠溶液。

　　3. 500μm/ml、100mg/ml秋水仙素溶液。

　　4. Giemsa（姬姆萨）原液（pH6.8）

　　Giemsa染粉 1g

　　甘油（丙三醇，glycerine, AR） 33ml

　　甲醇（methyl alcoholA, AR） 45ml

　　将染粉倾入乳钵，加几滴甘油，在乳钵内研磨直到无颗粒为止，此时再将全部剩余甘油倒入，放入60～65℃保温箱中保温2h后，加入甲醇搅拌均匀，保存于棕色瓶中备用。

　　5. 0.067mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.8）

　　Na2HPO4·12H2O11.81g

　　（或Na2HPO4·2H2O 5.92g）

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　　Ⅰ.小白鼠骨髓细胞染色体的制备方法

　　实验方法

　　1.动物按4μg/g体重的剂量经腹腔注射秋水仙素，3～4h后杀死动物。

　　2.取出动物后肢的胫骨和股骨。剪去两端。

　　3.将0.6～1ml 2%柠檬酸钠用1ml注射器接上5#针头注入骨髓腔，将骨髓细胞先冲入小碟取下注射器针头，反复吸打骨髓细胞，使细胞团块分散，转入10ml离心管。

　　4.视骨髓量之多寡加入0.4%KCl溶液8～10ml，随即将离心管置37±0.5℃水浴中低渗15～20min

　　5.以1000r/min离心8min

　　6.弃上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇:冰醋酸（3:1）固定液5ml，加固定液时注意不要冲动细胞团块。

　　7.加完固定液后，立即用吸管将细胞轻轻吸打均匀，静置固定20min。如此反复固定2～3次，每次20min。

　　8.固定的细胞经离心后，吸取上层固定液，视管底的细胞多寡加入少量新配制的固定液，将细胞团块轻轻吸打成悬液。

　　9.在干净、湿、冷的载玻片上滴2～3滴上层细胞悬液，在酒精灯上文火烘干（在空气干燥的地方可不用）。

　　10.将玻片标本平放于支架上，细胞面朝上，每片滴加1:100 Giemsa磷酸盐缓冲液3～4ml，染色10min。

　　11.在自来水管下细流冲洗数秒，去掉Giemsa磷酸盐缓冲液，用小块纱布擦干玻片标本底面和四周，显微镜观察和分析。

　　通过以上步骤就制备出可以进行观察的小鼠骨髓细胞染色体标本，用相应的显微镜及可进行观察实验。