新技巧让电镜与光镜强强结合

大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章： 摘要： 电镜和光镜都是细胞生物学的主要对象，但各有优缺陷。德国海德堡欧洲分子生物学试验室的研讨人员将这两种对象整合，并开辟出一种办法，可以或许让20个荧光卵白分子的旌旗灯号与3D电子断层成像直接比对，其准确度到达100 nm。该项结果揭橥在近期的《The Journal of Cell Biology》上。

　　电镜和光镜都是细胞生物学的主要对象，但各有优缺陷。德国海德堡欧洲分子生物学试验室的研讨人员将这两种对象整合，并开辟出一种办法，可以或许让20个荧光卵白分子的旌旗灯号与3D电子断层成像直接比对，其准确度到达100 nm。该项结果揭橥在近期的《The Journal of Cell Biology》上。

　　电子显微镜（EM）以及比来的电子断层成像（ET），供给了机体微细构造的信息。尽管有着超高的分辩率，但某些构造和罕见事宜仍很难经由过程电镜来不雅察。举个例子，在内吞膜泡与细胞膜分别的那一刻，即便研讨人员抓住了，他们仍须要赓续反复，以便收集到足够的数据进行统计剖析。这也是研讨人员试图让荧鲜明微镜与电镜匹配的原因。

　　尽管荧鲜明微镜不克不及与电镜所获得的分辩率匹配，但它仍为一个的对象，能追踪胞内事宜，并区分类似的构造。荧鲜明微镜能赞助研讨人员缩小他们应用电镜不雅察的规模。用通信作者John Briggs的话来说，细胞对于电镜是一个 处所，而对于荧鲜明微镜是一个小处所。

　　在曩昔几年，研讨人员开辟出一些办法，将光学显微镜与电镜整合。个中一种办法为先用荧鲜明微镜不雅察样品，然后立刻冷冻固定，进行电镜不雅察。然而，这种办法不克不及对快速变更的进程成像，也不克不及定位细胞内的构造。另一种办法是先制备标本，然后应用两种方法成像。经由过程这种办法，一个研讨小组定位出斑马鱼胚胎中的单个标志细胞，另一个小组可以或许近距离不雅察完全的人线粒体。然则此办法的准确度只有0.5 μm，研讨人员不克不及分辩比细胞器更小的构造。

　　Kukulski等则测验考试进步这种整合办法的分辩率。他们也是从尺度步调开端，冷冻样品，包埋在树脂内，并切成薄层，放在电镜格上。在不雅察之前，研讨人员在样品上撒一些渺小的塑料球，让它们在两种显微镜下都可见。这些颗粒作为界标，让研讨人员可以或许准确匹配荧鲜明微镜和EM或ET所获得的图像。Kukulski等肯定他们能将目的地位缩小到100 nm。

　　研讨小组随后测试了这项技巧。他们发明可以或许从细胞外面崛起的丝状伪足中遴选出罕见的HIV颗粒。尽管该病毒不克不及干扰狗肾细胞，但研讨成果暗示，该技巧让研讨人员可以或许在HIV颗粒进入人细胞时对准它们。研讨人员发明他们还能在内吞膜泡分开质膜的那一刻捕捉它们。Rvs167卵白附在内吞位点仅10秒钟，却也让研讨人员抓个正着。

　　Briggs以为，这种新办法让他们解决了曩昔不克不及解决的问题。下一步他们盘算肯定其他的综合技巧是否可行。例如，研讨人员正在融会超高分辩率显微镜和电镜，以及整合冷冻电镜和荧鲜明微镜。（生物通 ）

　　原文检索：

　　Correlated fluorescence and 3D electron microscopy with high sensitivity and spatial precision
January 3, 2011 // JCB vol. 192 no. 1 111-119

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