体视显微镜目镜BX53和BX43荧光显微镜的报价和波段
作者: 发布时间:2022-07-02 17:48:10点击:712
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奥林巴斯和尼康的三波段激发由两个的平衡组合(DAPI-FITC-TRITC和DAPI-FITC-Texas.)组成,每个组合由三个带通发射区组成,这三个带通发射区选择性地穿过蓝色、绿色、黄色、橙色和红色光谱区。允许我们探索激发滤光片和发射滤光片的激发和发射光谱,以及多色镜的激发和发射滤光片(为紫外、蓝色和绿色的多色荧光标记物设计的三波段激发光组合)。N区)影响信号电平、频谱交叉、整体滤波器性能和图像。
它
DAPI-FITC-TRITC滤光片组合用于同时检测DAPI、FITC和TRITC等具有相似光谱的荧光探针,三个窄带激发和发射带是紫外激发光和相应蓝光的特定区域,相应的蓝色激发光的绿色发射光,以及相应的绿色激发光和相应的橙红色发射光。
与标准DAPI-FITC-TRITC组合相比,DAPI-FITC-Texas红滤光片组合被设计成观察紫外-蓝色发射的带通区域和蓝-绿色发射的带通区域之间的细微变化。多带通区域提供更佳的检测条件,最小的光谱交叉和噪声,并允许同时观测DAPI、FITC和Texas.,或具有相似波长的荧光探针组合。
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首先,所选择的荧光样本出现在样本图像窗口中,而UV-蓝-绿三带通激励滤波器组合(DAPI-FITC-TRITC)的光谱特性显示在滤波器组频谱轮廓列下。吸收或发射)在光谱截面下,荧光截面的吸收和发射光谱(滤光片投影带通重叠)可以单独或共同观看。当一个或多个复选框被激活时,组合滤光片传输和发射sp在样品的吸收和发射光谱(不包括自发荧光植物样品)上附加有光谱,用于荧光观察。荧光吸收光谱在辅助区域填充棕色,在相应的发射光谱区域填充灰色。滤波器组合的特征显示在较低位置的黑色矩形框中。这些值通常从滑块的左侧到右侧更新。
为了操纵这个辅助部分,滤光片组滑块用于将由三个带宽激发的两个滤光片组合相互转换。由于滑块从左向右滑动,所以激发光的光谱和阻挡滤光片以及多色反射器被转换。值得注意的是,连续转换并不意味着任何滤波器组合都是可能的,也不意味着单个滤波器组合的频谱可以随意改变。建立每个光学模块中滤波器组合之间的连接。
在滤光片组光谱分布下,通过选择和去除相应的复选框,可以添加和去除单个滤光片光谱(激发、发射和多色反射器),并且可以通过同一歌剧添加和删除荧光的吸收光谱和发射光谱。观测样本的图像随滤波器的转换而变化,反映了信号强度和对比度的变化;这种变化是由滤波器组合引起的滑块运动引起的。用于观察的荧光类型在下拉菜单中列出。在任何情况下,用两个或更多个荧光探针对样品进行染色,并通过宽带通和窄带通阻挡滤波器的选择组合进行观察。
奥林巴斯和尼康的三波段荧光组合主要是针对三种颜色的荧光观测的特定组合而设计的,它们在具有类似吸收和发射光谱的探针的其他组合中同样有效。在反射和透射区域进行e速度转换,在更低干扰条件下可以区分各种激发和发射信号。为了保持三个不同荧光信号带的稳定性,这些滤波器的特殊组合也可以是结合多带通特性和多色反射器,使透射和发射区域与特定激发和发射滤波器互补。这些荧光组合的范围从紫外激发和蓝色发射到绿色激发和红色发射。
奥林巴斯和尼康DAPI-FITC-TRITC三波段滤波器结合了设计用于紫外区激发(385-400nm)的激励滤波器,该激励滤波器伴随有带通发射滤波器,该带通发射滤波器在其初始信号波段发射蓝色荧光(450-465nm)。该滤光片的长度组合在475-490nm波长范围内激发蓝光,在505-535nm处检测绿色荧光,第三个荧光信号由绿区激发光(5450-565nm)产生,该绿区激发光可引起橙红色光发射,并检测580-620nm波长。这种三色荧光带的组合可以同时优化DAPI、FITC和RITC的组合,尤其在观察不同细胞成分时,DAPI、FITC和TRITC的荧光组合也适合于这种滤波器组合,因为其光谱特性。Alexa For 488和MITO跟踪器Red CMXROS类似于FITC和RITC。
在三色激励模块中,与其他多波段组合一样,多色反射器的设计原理基于不同荧光信号的分离以及最小光谱交叉和噪声的检测。分束器通常使用,多波段组合使用具有几个通带区域的多色镜。通常,反射器的截止波长仅比短波长激发光的峰值高出几纳米,然后是允许第二反射器的快速截止。激励带通。在三带滤波器组合中,这种传输-反射模式可以在第三个信号信道中重复。DAPI-FITC-TRITC模式中使用的双色反射器具有多个通过区域。这些截止波长在435、500和570nm。
薄层干涉法在多带滤光片组合中的应用平衡了荧光信号电平,从而获得了更佳的成像效果。热漂白和样品毒性被最小化。这对于设计用于紫外光谱中单个荧光激发的滤光片的组合特别重要,因为它允许在较短波长下高激发效率。短波长激发峰在尼康三波段组合的传输谱区被反射,通过检测滤波器组合的传输谱区可以得到相同的结果。例如,双波段FITC-Texas Red和三波段DAPI-FITC-Texas。红色组合利用相同的双色反射器和发射滤波器,仅在激励滤波器部分不同,其中第三短波带通被添加到DAPI激励模式。
为了同时检测DAPI、FITC和德克萨斯红(或在相似光谱区域的荧光),可以容易地观察到DAPI-FITC-德克萨斯红三带滤光片的组合。分别地)和DAPI-FITC-TRITC组合具有相似的特性,但是与TRITC相比,它们的绿色激发红光发射发生在较长的频带中,用于该组合的激发滤波器具有395-410nm的带通区域,并且发射滤波器具有450-410nm的带通区域。470纳米。这些谱带适用于DAPI和类似荧光组观测,第二谱带激发光为蓝色490~505nm,相应的绿光发射为515~545nm(适用于FITC和类似荧光组观测)。德克萨斯红荧光信号通道的范围为560-580nm,红色区域的发射波段为600~650nm。
虽然DAPI、FITC和Texas Red三种波段的组合更好,但是用这种滤波器组合也能够观察到具有相同吸收和发射光谱特性的荧光探针。与DAPI-FITC-Texas Red模块相比,DAPI-FITC-TRITC模块具有红色。在短波长观察下,发射带通在15nm处可以调节,从而产生更橙色的图像颜色。DAPI-FITC-Texas Re滤波器组合中的双色反射器(分束器)的带通区域根据窗口位于445510和590nm。激发和发射滤光片。两种尼康三色带通滤光片组合的两个彩色反射器和滤光片参数显示在表1中。
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