肖特显微镜照明一些告诉你为什么这种转染

大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章： 脂蛋白D29（VER）II)作为DNA转染试剂的第二代脂质体产品，对HEK293相关细胞和其他哺乳动物细胞具有高转染效率和低细胞毒性，通过加入转染肽，基因转染效率提高了3~4倍。在24孔板上完成666次转染，6孔板可完成333次转染。
    
     右：根据厂家提供的转染步骤，用上述转染试剂将GFP cDNA(pEGFP-N3)转染HepG2细胞(在胶原蛋白预处理培养皿中培养)，转染48小时后，GFP阳性细胞(%)和荧光强度为：流式细胞术检测。
    
     左：血清和抗生素的存在提高了LipoD293试剂（升级版）对HepG2细胞的转染效率。HepG2细胞在三种不同条件下转染（生长在胶原蛋白处理的培养皿上）——无血清和抗生素，10%血清和抗生素，5小时。转染后无液体交换。
    
     右：采用上述转染试剂，将荧光素酶蛋白（phRL-CMV）和绿色荧光蛋白（GFP）的cDNA按照生产厂家提供的转染步骤转染CHO细胞，转染24小时后，荧光素酶的活性恢复正常。用贝克曼的化学发光监测仪进行检测，用BD的FACS检测GFP阳性细胞率。
    
     左图：LipoD293试剂（升级版）与Lipofecat.2000（L2K）、TransIT和Fu.6（USD1000L）比较。
    
     Primary cells of rat arterial smooth muscle were prepared and transfected into the cells using LipoD293 reagent (left) and Lipofecatmine 2000 (L2K, right) according to the manufacturer's transfection procedure.After 24 hours of transfection, GFP fluorescence was detected by Nikon Eclipse 2000 fluor荧光显微镜观察转染效率。
    
     LNCap细胞严格按照ATCC推荐的方法培养和传代，与pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1，总1.0微克)共同转染，根据制造商的科学实验使用LipoD293试剂(左)和Fu.HD(右)。转染24小时后，用尼康Eclipse 2000荧光显微镜检测GFP荧光，评价转染效率。
    
     在血清和抗生素存在下，95%的HepG2细胞和Saos-2细胞分别与pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNA融合，转染48小时后，用Zeiss 510激光共聚焦显微镜和β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测转染效率。
    
     将PEGFP-C1质粒转染HEK293细胞，转染后24小时用LipoD293体外DNA转染试剂(Ver.II)(上)和知名品牌Invitrogen 293转染试剂(下)分别进行DIC(左)和荧光(右)成像。
    
     用LydD29、93FiCin、XFECT和FUGEN 6分别转染30mL的93F细胞。将pEGFP6xHe质粒转染到细胞中，按照制造商的标准转染程序进行转染。PEGFP6xHIS质粒的剂量为LYDD29，20微克。所有其他三种转染试剂使用30微克质粒DNA。
    
     转染48小时后，用尼康荧光显微镜（左边4幅）进行GFP荧光成像，A：LipoD293；B：293.in；C：X.和D：Fugene 6。用Ni-NTA亲和柱技术分离6GFH标记的GFP荧光蛋白，将5微洗脱液装入SDS-PAGE凝胶电泳，用考马斯亮蓝染色（右上）分离。路1是LipoD293293，道2是标准蛋白质分子，路3是X.，路4是293.in，路5是Fugene 6。
    
     用LipoD293试剂和Lipo.amineLTX试剂分别转染293T细胞,用GFP载体pHR-SIN-cppt-CMVEWP测定慢病毒滴度,将1x10^5293T细胞加入24孔板各孔中,加入不同量的缓效上清液,1ml（顶部）和10ml（底部）。
    
     5天后，流式细胞仪检测细胞。在右上角的数字显示，转导的细胞的百分比，确定慢病毒滴度的慢病毒转染和LTX，通过产生的效价进行量化分为8 ^ 6 3x10 ^ 6涂/毫升。
    
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