自制显微镜镜头凯伦光学教你如何使用显微镜

大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章： 在了解显微镜主要部件的名称、结构和功能后，为了更好地发挥显微镜的各种功能，提高工作效率，保证显微镜观察和摄影过程中的更佳效果，用户必须了解和掌握掌握显微镜的正确调试方法和使用方法。特别是在新一代显微镜中，具有多种功能，可以进行各种显微镜观察，正确的调试方法和使用方法尤为重要。以实例为例，简要介绍调试和使用方法。
    
     为了使显微镜的视场均匀而充分地照明，在显微镜的次安装和调试中，有必要对照明系统进行调整，这是显微镜的正确使用，并得到正确的，能够得到重要结果。另外，正确控制照明系统的调节是使用显微镜在更换灯泡过程中必要的步骤，也是在日常使用过程中不时地检查显微镜的性能。显微镜照明系统的调整主要由4部分组成：
    
     首先，打开灯室的外壳，通过压力弹簧夹将卤素灯泡装入插座。安装卤素灯泡时，手指不能直接接触灯泡（可以用软布或纸隔开），以免在灯泡上留下指纹和其他污垢，影响灯泡的使用寿命。
    
     (2)将灯室放在桌面上，接通电源，用专用的螺丝刀调整灯的调焦旋钮孔(标记)，使灯丝投射到墙体1-2m外，调整灯丝图像清晰，然后调整灯的高低位置；调整螺丝孔（标记-），使灯丝位置合适；然后调整灯的左右位置以调整螺丝位置。
    
     (2)测试和校正光源发光体(灯丝)在显微镜中的位置的目的是将发光体的像端正确地调整到物镜的视野，并确保显微镜的充分和均匀的照明。光源的角度是调节Kuller照明系统的前提，其基本要求是望远镜配有显微镜。
    
     (2)选择10个物镜，打开光源程序找到样品并清晰地聚焦，然后使用40个物镜清晰地聚焦样品(40个物镜可以看到灯丝的全貌)；
    
     取下其中一个眼镜，换到中间望远镜，抓起白色部分，用另一只手伸展黑色目镜以观察视野中的灯丝图像。
    
     如果灯丝位置不合适，则调整孔，沿水平方向调整灯丝图像，调整孔，沿垂直方向调整灯丝图像，直到将灯丝图像调整到刚好充满圆形图像的目标孔径为止；
    
     调整后，将磨砂玻璃套筒插入原位置，取出中量程望远镜，更换目镜进行下一次调整。显微镜外照明灯室的调整及光源发光体ins位置的校准。IDE显微镜只需在显微镜次安装和调整后更换灯泡。一般情况下，使用显微镜时，光源灯室不能任意调节和乱动，如有乱动，可将上述步骤移回原状。
    
     (3)科勒照明系统的正确调整是显微镜正确调整的主要任务之一，其关键在于科勒照明系统的调整。对于每一个使用显微镜的人，尤其是那些拍摄显微照片的人，我们都应该有一定的了解。了解和掌握Kuller照明系统的原理及其调整步骤，以充分发挥显微镜的功能，使拍摄的照片更加一致和完善。光源上任何一点的ed都照亮显微镜的范围，光源上每个点发出的光在显微镜的视野中都照亮了非常完整和均匀的照明。用于观察视场的形状和足够的照明，以防止杂散光影响或干扰图像系统，以及避免在照明期间在底片上形成雾。高度可调的Kuller照明系统的基本组成部分是视场。可同轴调节的膜片和集中器系统。
    
     (2)将聚光器的前端透镜放入光路，将光圈调整到中等位置(不太小)，然后将聚光器提升到顶部位置，将聚光器转台调整到亮场J。
    
     _在视场中将存在局部照明区域或亮点，其是场孔的模糊图像，在其中可以清楚地看到样本的细节；在其之外是更暗的视场，不一定能够清楚地看到样本的细节；
    
     _聚焦镜稍微向下，使视野逐渐减弱亮点，慢慢变成清晰的多边形图像，这就是视野的清晰图像；
    
     一般来说，多边形的图像不在视场的中心，因此需要调整冷凝器的一对对准螺钉，以将孔径多边形的图像调整到中心位置。
    
     逐步打开光阑视场，使多面图像进入视野内多边形，进一步检查调谐情况，如中心不理想，继续微调中心螺钉；
    
     _视场孔径稍大，使得其多侧面图像在视场边缘消失，从而调整了Kuller照明系统。调整Kuller照明系统后，整个视场照明均匀，拍摄的照片明亮。今后使用中应特别注意：a.视场光阑不能任意打开，但可随着物镜倍数的增加而减小，随着物镜倍数的减少而增大；冷凝器的高度和高度不能乱调，否则会破坏调整后的Kuller照明系统；C.透镜前端的透镜置于光路之外，使用10目以上的物镜时，透镜前端的透镜应置于光路中。相位系统的干涉，为了能够拍出更完美的照片，应该在使用每个倍数的物镜时，视场光阑刚好消失在观察视野的边缘上，这是比较复杂的工作，但必须做到。ler方法是预先调整每个多物镜对应的视场孔径，并做好标记，然后根据标记直接使用到相应的位置。
    
     (4)孔径光阑的正确使用，因为冷凝器的孔径会影响显微镜的分辨率，应该掌握正确的使用方法。在过去，由于对孔径光阑缺乏了解，人们常常把它当作调节亮度的工具。视场亮度。虽然调整光圈可以在一定程度上改变视野的亮度，但它将直接影响成像的对比度、对比度和分辨率，在使用过程中应尽量避免。在聚焦透镜中，为了获得更佳的观察分辨率，特别是显微照相时，在样品每次被清晰聚焦后，必须将光圈光阑调整到所用物镜的数值光圈(物镜光圈图像)的23的大小。调整方法是将中心望远镜聚焦在视场中的黑色相位差环上，调整光圈光阑，可以看到多边形光圈图像，然后将其调整到等于目标光圈图像的23。在黑色相位差环和圆形视场之间，为了方便起见，可以预先调整并标记与多个物镜相对应的孔径，以避免每次使用都重新调整。
    
     2。显微镜的成像光学系统的调节和显微镜的成像光学系统的调节是根据不同显微镜的需要而进行的。本文简要介绍了显微成像光学系统中几种比较成熟的方法和相应的调整方法。
    
     (1)自显微镜发明以来，明场是最传统和最常用的应用方法。基本部件：a.物镜：任何物镜都可以观察到，用于明视场；B.聚光器：各种聚光器都可以，更好带有光圈光阑。调整方法：对上述显微镜的Cooley照明系统进行调整后，即可应用视场。应用：所有染色的组织切片、血涂片等。注：a、采用明场法时，必须调整Kuller照明系统；膜片不能任意打开。当使用10、10或更多个物镜时，应将聚光器的前透镜从实际中取出，分别放入光路中；C.不能用聚光器的光圈来调节视场的亮度。对于显微镜，必须调整冷凝器的孔径使其等于物镜数值孔径的23。
    
     (2)透射光相位对比度(相位对比度)是现代显微镜中的一种对比度增强方法。基本元件：相位差物镜、多用途明场相位差聚光器、中型望远镜、绿色滤光片。e调整Kuller照明系统，用亮场法使样品聚焦清晰；B.将聚焦透镜移到Ph1对准转台刻度线的位置，选择10相物镜代替待观察的透明样品；取下眼镜，改变视场中的两部分，焦点集中在视场中的两部分。视场中的干涉环不一定重合，冷凝器上的两个调节装置(用于调节相位差环的左右位置的调节杆和用于调节前后位置的摩擦旋钮)使光透射。环向左右移动，与黑环重合；完成后，换回观察目镜，将绿色滤光片压入光路，可观察样品的相位差图像；F.20和40物镜观察，聚光器应位于Ph2 po内。适用范围：适用于各种细胞、活体组织、组织切片、水生生物等透明或无色样品的观察。
    
     (3)利用差分干涉对比度(DIC)技术克服了样品细节被光晕包围、样品或组织切片厚度非常薄的局限性。原则上，可以大于10米。采用双光束干涉原理。设计次微分干涉对比法。调整方法a.DIC必须根据对Kuleming系统的调整方法进行调整；B.首先使用10个物镜来确定物镜的焦点位置，在明亮的视野中可以清楚地看到；C.将偏振片放入光路，注意其方向应为东西方向；D.将聚焦镜转台转到10对物镜上；使用的位置为DIC 0.304.E.在物镜后部或物镜转换器上插入用于10个物镜的DIC滑块；f.将分析仪插入成像路径，注意其方向应为南g。改变要观察的透明样品，打开光源使样品聚焦。清晰；H。调整DIC滑块进行差分。干涉相位对比度图像达到更佳效果，即消除效果最明显；I。同时，可以调整冷凝器的孔径，达到更佳对比度效果；J。然后微调细节。K.如果插入一阶的红色延迟板，对比度效果更好。同时调整DIC插入件，可以看到在视觉领域、红色、橙色、黄色、gr等变化的明亮颜色。蓝色、紫色、粉红色、粉红色、紫色和金色。适用范围：透明或不锈组织切片，厚度约100m，培养活组织及活细胞，微生物等。
    
     (4)入射对数荧光Epi-FL(.-loght fluores.Epi-FL)是现代显微镜中发展起来的一种强对比度增强方法，它将激发荧光的光源改变到物镜的顶部。将光从物镜顶部注入物镜激发样品，方法简单有效，50W光源的强度比250W透射荧光法强。GHT、蓝紫光、蓝紫光和波长较短的绿光激发样品。只要样品中含有荧光成分，它就会吸收短波的激发光，释放出波长较长的荧光，不同的物质只能吸收特定波长的激发光，发出的荧光就会有特定的波长，因此，它是非常有效的具体识别。例如，一些致病细菌和螺旋体在受到紫外光刺激后会发出特异性荧光，这很容易识别。这种物质吸收激发光并发射。这种独特的荧光方法称为自体荧光。某些物质本身不吸收激发光，或吸收后不能释放荧光，但能吸收或吸收特定的荧光颜料或染料。这些特定的荧光颜料或染料只能吸收特定的激发光，然后释放特定的荧光，从而间接地鉴定一种物质，称为间接荧光。医学、生物学和工业的调整。调整方法：显微镜下的荧光部分大致相同。
    
     (1)安装水银灯a。打开包装，取下水银灯，小心地安装在顶部散热帽上。安装时，注意手指不能直接接触灯的前面和散热帽。水银灯的密封口应该与散热帽的左侧或右侧相对；B.将水银灯的上电极安装在散热帽底部的孔上，固定水银灯的下电极和上电极引线的另一端。灯具分别安装在灯座的插座内并固定；C.将螺钉锁在散热器上后，将水银灯与灯座、散热帽一起小心地装入灯室，锁住相应的螺钉，然后插入布线。以及插座上的灯座放入特殊插座上的水银灯电源的后面。详细安装方法参照说明书。
    
     (2)显微镜外水银灯房的初步调整：a.打开水银灯的电源，让水银灯预热10-15分钟；B.将水银灯房放在桌面上，让水银弧投射到2-3米外的墙上，画出地平线。将灯室窗户的中心线高到地面；C.转动灯室的调焦旋钮，形成水银弧。图像清晰地投射在墙上；D.分别调整灯室外壳上的五个调节螺丝孔，并调整汞弧并列，尽可能接近，但不重叠。
    
     (3)显微镜下水银灯水银弧位置的检测：a.更大限度地打开水银灯照明系统的视场孔径；B.将荧光滤光片组推到激发蓝光的位置，以避免水银灯中的蓝光太刺眼。把观察的样品或片子放在物台上，用比盖玻片稍大一点的白色盖住。取出物镜，通过白纸上的物镜转换器的空间照射蓝光。白皮书上会有一个蓝色圆形照明区域。汞弧图像及其反射图像应出现在该地区的中部。另外，灯室的调焦旋钮可以调整到最清晰，然后灯室外壳可以单独调整。5个调整螺丝孔，直到汞弧图像及其反射图像并排放置在照明区域的中心位置。他向后透镜，通过目镜看到蓝光激发的白纸的黄绿色荧光；f.仔细聚焦，看白纸的纤维；移除白纸，样品上的荧光细节模糊可见，易于清晰聚焦。
    
     (4)目前常用超高压汞灯，该灯具有一对钨电极和液态汞(室温下附在管壁上)。当未点燃时，管内的压力非常低。在灯的两个电极之间施加电压角后，水银蒸发成水银蒸汽，形成水银弧，产生强烈的光，温度上升。管内的压力迅速上升到10大气压。由于高压气体放电，我们必须这样做。了解汞灯的特性，安全使用汞灯。观察前应先开灯；B.水银灯在使用中不能随意开闭；C.水银灯电源切断后，必须等待15-20分钟，水银灯自燃、冷却后再开灯，造成严重后果。如果水银灯中的水银蒸气没有完全液化，则会造成严重的后果。供应水银灯、水银灯爆炸、水银蒸气扩散到整个实验室，造成人员中毒，不仅造成水银灯的损失，而且破坏室内集光聚光灯部件。h 600小时。汞灯的使用寿命与开关的数量成反比。一批样品要观察2-3小时。水银灯要看重和昂贵。水银灯寿命结束的标志是灯点燃和黑化的困难。许多透明或半透明的样品，如细菌、微生物、细胞中的细微结构和晶体包涵体，在光场显微镜下是看不见的。如果采用暗场法，可以大大提高样品的可见度。暗场法用来观察在暗背景中点亮的样品的轮廓和细节。普通光学显微镜的更高分辨率为0.2m，而暗场显微镜的更高分辨率为0.2m。e不能清楚地区分样品的结构细节，但可以看到0.004m以上细颗粒的存在，即能看到亚显微结构，特别适合于细颗粒和细菌的观察。d法是暗场冷凝器。Cooley的照明系统在使用前必须用明场冷凝器进行调整。当换成暗场冷凝器时，取出滑块（样品），将浸没的油滴放在冷凝器顶部，并将滑块放在物台上。浸没的油填满了两者之间的缝隙。冷凝器必须采用100油透镜，孔径可变。另一种中功率干式暗场聚光器可以采用中功率物镜。这种聚光器具有中心光屏障，并且照明光只能通过光束和聚光器边缘之间的透射环进入聚光器。相位差透镜低于10和10以产生低功率暗场效应。
    
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