门头沟PAP包埋前染色的操作步骤和PAP法包埋后染色

作者：发布时间：2022-07-02 19:59:03点击：210

信息摘要：

大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章：PAP包埋前染色的操作步骤和

大家好，这里是老上光显微镜知识课堂，在这里你可以学到所有关于显微镜知识，好的，请看下面文章：

PAP包埋前染色的操作步骤和PAP法包埋后染色

PAP法常用包埋前染色，现以超氧化物歧化酶为例，说明具体

的操作步骤。

(l)固定组织恒冷箱冰冻切片10um用于光镜，振动切片或手切

薄片等用于电镜。

(2)切片经PBS(pH7.4)漂洗。

(3)0.3%H2O2甲醇溶液室温10-30min以封闭内源性过氧化物酶。

(4)0.25%tritonX一100处理10min。

(5)正常羊血清(1:30 PBS稀释)室温30min。，吸干。

(6)抗体(免抗SOD血清，l:2000)4℃湿盒中48-72h。

(7)0.lmol/L PBS漂洗(3X5min)。

(8)羊抗免一lgG(l:30-50)室温30-60min。

(9)0.lmol/PBS漂洗(3X5min)。

(10)免PAP复合物(1:100)室温30-60min。一抗、二抗和PAP的合

适稀释度要通过预试验来确定。

(11)0.lmol/L PBS漂洗(3X5min)

(12)用含0.05%二氨基联苯胺(DAB)和0.01%H2O2的混

合液(用0.05mol/LTris-HCI缓冲液PH7.4配制)室温15min。显

色。镜下控制反应强度，适时终止显色。

(13)0.lmol/L PBS漂洗(3X5min)，光镜观察。

(14)电镜研究时，用4%戊二醛再固定60min，PBS漂洗、解

剖镜下检出免疫阳性部位.修整切片，用1%锇酸后固定30-

6Omin.若用1.5%亚铁氰化钾一l%锇酸后固定，这样可不进行电

子染色，直接电镜包埋、切片和观察。

(15)对照:①用正常兔血清代抗S0D血清作对照:②不加

抗SOD血清的空白对照;③吸附试验，用SOD吸附抗SOD血清。

以上三种对照均为阴性。

PAP法包埋后染色

(l)固定组织按常规电镜包埋、切片。

(2)将载有切片的镍网在5%的H2O2液中刻蚀2-3min。，生

理盐水冲洗，滤纸吸干。其余操作步骤同PAP包埋前染色法的

(3)-(14)步同。

网站网友点击量更高的文献目录排行榜：点此链接关注页面底部公众号，开通以下权限：一、获得问题咨询权限。二、获得工程师维修技术指导。三、获得软件工程师在线指导 toupview,imageview,OLD-SG等软件技术支持。四、请使用微信扫描首页底部官主账号！

本文标签：

联系电话