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作者: 发布时间:2022-07-02 18:01:25点击:373
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德国Max Plank医学研讨所的研讨者为扫描电镜剖析嵌入和染色了全部小鼠脑部。
从胼胝体拦腰切下的电镜用序列块状样本,有50个髓轴突,色彩随机。
迄今为止,小鼠脑最庞杂的地图只有10%是完全的,并且是基于所谓的打针追踪研讨,剖析之前几千个 脑被打针、成像、分列,然而这一切都邑转变。
Winfried Denk传授及其同事正在预备一个完全的小鼠脑部,愿望经由过程serial block-face SEM在足够的分辩率下为 脑成像,追踪甚至最细微的神经纤维,又称为轴突。
经由过程将主动块面成像与在电镜真空室中的组织序列切片组合,Denk及其同事在2004年次设计了serial block-face SEM。固定小片组织,染色并将其嵌入树脂中,然后安装在电镜里,旁边放个超薄切片机。
块状组织的外面经由背散射电子检测成像,去掉一薄层, 下面的层面被扫描。扫描时,要举高块状组织以确保样本坚持在聚焦状况,这种方法下,SEM可以主动确保几千张图片都完善的分列,进而生成高分辩率的3D图像。
Denk及其同事应用这个技巧获得了确保全脑剖析的图片。摘取的老鼠全脑造就在染色液48h,冲刷,再次造就。经由过程在分歧染色液中试验以及造就试验,研讨者最 化的比较 脑中的膜和髓鞘。
80nm像素 小,老鼠全脑冠状块组织的扫描电子显微镜图像,展现了来自丘脑腹后外侧核50个髓轴突的重构。每个轴突都有个特殊的色彩。
然后,在评估染色质量和样本的平均度之前,他们将染色脑片嵌入低粘度环氧树脂。最初的扫描电镜研讨显示全部脑片样本合适未来的序列block-face电镜剖析,研讨者可以或许追踪称之为轴突的单个髓神经纤维。
正如Denk强调的,他的团队随机遴选了50个神经的轴突,并手动做了标志。“用这种办法要追踪小鼠脑部的所有神经须要消费太长的时光,然则我们已经展现了我们的图像有着足够的分辩率和衬度以追踪所有的髓神经轴突。”Denk说。
之后,研讨者愿望扫描全部脑部,Denk接着说:“应当为盘算机科学家供给驱动以成长需要的剖析办法。”