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作者: 发布时间:2022-07-02 18:03:13点击:557
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比来中科院生物物理所的徐平勇课题组在知名期刊ACS NANO上揭橥了题为Development of a Reversibly Switchable Fluorescent Protein for Super-Resolution Optical Fluctuation Imaging (SOFI)的文章,申报了一种可用作高速活细胞超分辩率显微成像的新型重复光激活绿色荧光卵白kylan-S。
绿色荧光卵白(GFP)的创造因其可以或许供给对于活细胞和活体动物的靶向基因润饰标志而获得2008年诺贝尔化学奖。进一步,由基因改革的光激活荧光卵白(PAGFP)可以或许供给单分子特征,而实现了超分辩显微成像,使得这一技巧获得2014年诺贝尔化学奖。
随后,超高分辩显微成像技巧的成长向着活细胞动态超高时空分辩率显微成像迈进。个中,光学波动超高分辩成像技巧(SOFI)是一种简略可行的活细胞超高分辩显微成像新技巧,它应用特别荧光卵白(或者染料)的重复光开关特征以及成像像素点随时光的波动和相干特征进行成像,因其可以冲破单分子发光限制,同时实现多个荧光分子高速成像而敏捷成为国际存眷的热门。
kylan-S与现有的实用于SOFI成像的Dronpa比拟具有凸起的长处:在波动(fluctuation)状况下的荧光明度比Dronpa高6-8倍,波动动态规模高4倍,同时具有极高的光学稳固性。Skylan-S是一种单体,是以可以或许用于活细胞成像而不影响目的卵白的定位和功效。基于这些特征,Skylan-S运用于SOFI超分辩成像中具有极高的时空分辩率。在SOFI成像中,获得了1.5秒的超高时空分辩率成像(每帧3毫秒,500帧进行SOFI重构),可应用4阶SOFI获得clathrin-coated pits(CCP)的环状构造构造,空间分辩率好于100nm。
同时,Skylan-S可以或许动态不雅察亚细胞构造60s以上。而Dronpa在帧就无法实现这一高分辩率,在30s中跨越一半根本被漂白。应用Skylan-S和Dronpa分离标志细胞的肌动卵白丝,Skylan-S可以或许以丰硕灰阶显示分歧标志浓度的卵白丝的精致构造,而Dronpa则仅能供给信噪比异常有限的图像。别的,Skylan-S在较高能量的488纳米激光照耀下具有很好的单分子特征,实用于PALM成像。同时,它也普遍实用于传统的共聚焦和双光子成像。
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